Search Knowledge Base

» Unlabelled » ISOLASI FLAVONOID DARI TEMU KUNCI

Minggu, 06 Mei 2018

ISOLASI FLAVONOID DARI TEMU KUNCI

di Mei 06, 2018
Share this

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA
PERCOBAAN KE III (TIGA)
ISOLASI FLAVONOID DARI TEMU KUNCI (Boesenbergia pandurata)


 



Nama                                      : Nurani Puji Pangestuti
NIM                                        : 1606067040
Kelompok                               : A6
Hari, Tanggal Praktikum        : Senin, 23 April 2018
Dosen Pembimbing                : Dian Ratna Rianti, M.Sc., Apt



LABOTATORIUM FITOKIMIA
AKADEMI FARMASI INDONESIA YOGYAKARTA
2018




PERCOBAAN
ISOLASI FLAVONOID DARI TEMU KUNCI (Boesenbergia pandurata)

A.    TUJUAN
Mahasiswa mengetahui langkah-langkah isolasi, mampu melakukan isolasi pinostrobin dari temu kunci dan mengidentifikasi isolat yang diperoleh.

B.    DASAR TEORI

Maserasi
Secara harfiah berarti merendam.metode ini merupakan metode yang paling sederhana. Tidak ada batas pelarut dalam metode ini. Catatan jika menggunakan metote ini, simplisia dibasahkan terlebih dahulu, jika dikhawatrikan akan ada simplisia yang tidak teraliri pelarut. Proses maserasi sendiri dilakukan secara berulang dengan memisahkan cairan perendam dengan cara penyaringan, dekantir atau di peras, selanjutnya ditambahkan lagi penyari segar kedalam apas hingga warna rendeman sama dengan warna pelarut.
Flavonoid
Senyawa flavonoid adalah senyawa yang mengandung C5 terdiri dari atas dua inti telonat yang dihubungkan dengan tida satuan carbon. Cincin A memiliki karakteristik bentuk hidroksilasi floroglusinol, dan cincin B biasanya 4-, 3,4- atau 3,5,4- terhidroksilasi  (Sastrohamidjojo, H., 2001).
Struktur dasar flavonoid C6-C3-C6 :
Kromatografi
Kromatografi adalah suatu nama yang diberikan untuk teknok pemisahan tertentu. Pada dasarnya semua cara kromatografi menggunakan ua fase yaitu fase tetap (stationary) dan fase gerak (mobile), pemisahan tergantung pada gerakan relatif dari dua fase tersebut. Cara-cara kromatografi dapat digolongkan sesuai dengn sifat-sifat dari fasa tetap, yang dapat berupa zat padat atau zat cair. Jika fasa tetap berupa zat padat maka cara tersebut dikenal sebagai kromatografi serapan, jika zat cair dikenal sebagai kromatografi partisi. Karena fasa bergerak dapat berupa zat cair atau gas maka semua ada empat macam sistem kromatografi yaitu kromatografi serapan yang terdiri dari kromatogarafi lapis tipis dan kromatografi penukar ion, kromatografi padat, kromatografi partisi dan kromatografi gas-cair serta kromatografi kolom kapiler (Hostettmann, K., dkk., 1995).
Temu Kunci
1.     klasifikasi
Divisi        : Spermatophyta
Sub divisi  : Angiosperma
Kelas         : Monocotyledonae
Bangsa      : Zingiberales
Suku          : Zingiberacea
Marga       : Boesenbergia
Jenis          : Boesenbergia pandurata (Roxb.) Schkecht.
2.     Monografi dan penyebaran
Temu kunci merupakan tanaman semak yang berumur tahunan. Saat tanaman tidak terlalu tinggi karena hanya sekitar 30-1—cm. Batangnya tersusun atas gabungan pelepah-pelepah daun. Warna batangnya hijau agak merah
      Daunya tidak terlalu banyak, yakni hanya sekitar4-5 helai, bentuk bulat meruncing ke ujung dan pangakal, warnanya hijau dan tangkai daunnya beralur, lebar 4,5-10 cm, panjang 23-38 cm. Tulang daunnya besar, berlapis tipis tembus cahaya. Permukaan daun sebelah atas dan bawah bila diraba terasa licin tidak berbulu, meskipun ada juga bagian daun yang berbulu halus (Muhlisa, 1999).
      Rimpang tumbuh dibawah permukaan tanah secara mendatar dan beruas, sedikit keras, bersisik tipis dan berbau harum. Anakan rimpang bergerombol kecil disebelah rimpang induk, serupa rangkaian anak kunci. Jika dibelah, bagian luar rimpang warna hijau kekuningan sementara daging rimpang sebelah berwarna kuning muda. Daging rimpang menyebarkan aroma temu kunci (Muhlisa, 1997).
3.     Khasiat dan Kandungan Kimia
Rimpang temu kunci mengandung saponin, flavonoid dan minyak astiri. Rimpang temu kuncu ini berkhasiat untuk memperbanyak air susu ibu dan penyegar tubuh bagi ibu setelah melahirkan. Daunnya berkhasiat sebagai obat sariawan (Depkes RI, 2001).

C.    ALAT DAN BAHAN
ALAT
1.     Seperangkat alat maserai
2.     Seperangkat alat KLT
3.     Beaker glass
4.     Stirer
5.     Rotavapour
6.     Cawan porselin

BAHAN
1.     Simplisia temu kunci (Boesenbergia pandurata)
2.     Etanol
3.     Etil asetat
4.     Heksan
5.     Standar pinostrobin

D.    CARA KERJA
1.     EKSTRAKSI
Sebanyak 100 gram rimpang temu kunci yang telah dihalusjan dimasukan kedalam beaker glass 500 ml, kemudian tambahkan 200 ml etanol. Campuran tersebut kemudian selanjutnya diaduk selama 1 jam menggunakan stirer. Campuran tersebut kemudian disaring. Hasil saringan dikumpulkan dan diuapkan dengan penguap putar (rotavapour) hingga volume kurang lebih 10 ml. Hasil rotavapor dikumpulkan dan dipindahkan ke cawan porselin.
2.     ISOLASI DENGAN KLT PREPARATIF
Ekstrak yang sudah kental ditotolkan pada plat silica GF 254 sepanjang 5x10 cm sebanyak 10 kali. Pengembang yang digunakan adalah etil asetat : heksan (4:1). Dideteksi  dengan menggunakan lampu UV 366 nm, bercak dengan pita ditandai. Becak yang ditandai dekerok dan dilarutka dalam etanol kemudian etanol diuapkan.
3.     IDENTIFIKASI
Ambil sedikit padatan dengan ujung spatel kecil, larutkan dalam etanol. Larutan siap dianalisis secara kualitatif dengan kromatografi lapis tipis dengan kondisi sebagai berikut:
a.      Fase diam             :  Silika gel GF 254
b.     Fase gerak             : Etil asetat : Heksan (1:4)
c.      Cuplikan               : Lautan sampel dan pembanding pinostobin dalam etanol
d.     Deteksi                  : UV 254
Catat harga Rf dan bandingkan dengan harga Rf standar pinostrobin

E.     HASIL

Nama simplisia          : Temu Kunci ( boesenbergia pandurata )
Metode Ekstraksi       : Maserasi
Jumlah perlarut          : 200 ml
Randemen Ekstrak     :
            Bobot hasil ekstraksi : 2,356 gram

           
            Randemen : 2,356 gram x 100 %       = 47,12 %
                                    5 gram

Pemerian Ekstrak :
Aroma             : Bau khas aromatik

Warna             : Kuning muda                        sedikit kecoklatan
Bentuk/tekstur: Cair

Hasil pengamatan dengan kromatografi : Sinar UV 366nm


Proses sebelum terbentuknya ekstrak simplisia :

 


F.     PEMBAHASAN

Sampel yang digunakan dalam percobaan adalah temu kunci. Tujuan pratikum kali ini adalah untuk mengetahui langkah-langkah isolasi, yaitu mampu melakukan isolasi pinastrobin dari temu kunci dan mengidentifikasi isolasi yang diperoleh. Isolasi dilakukan dengan metode maserasi dengan menggunakan pelarut yang sesuai yaitu dalam pratikum digunakan etanol. Metode maserasi ini bertujuan agar zat aktif akan terdesak keluar dari sel, dilakukan pengadukan agar serbuk dan pelarutnya bisa bersentuhan semuanya, sehingga flavonoid yang terdapat dalam serbuk tersebut dapat tersari sempurna. Pengadukan dilakukan selama 1 jam menggunakan stirer. Hasil maserasi/campuran tersebut disaring  menggunakan kertas saring filtrat yang diperloleh kemudian dipekatkan atau diuapkan dengan penguap putar (rotary evaporator) hingga pelarutnya hampir habis dan diperoleh ekstrak, tujuan diuapkan agar pelarut benar-benar hilang dan memperoleh ekstrak kental. Penguapan dengan rotavapor dilakukan karena tekanan yang diperoleh  dari rotavapor menyebabkan etanol dapat menguap dibawah titik didihnya sehingga suhu yang digunakan tidak terlalu tinggi dan tidak merusak ekstrak yang diperoleh . digunakan pelarut etanol karena dapat menembus semua jaringan simpisia/tanaman untuk  menarik senyawa aktif keluar dari jaringan sel baha. Etanol tidak menyebabkan pembengkakan pada membran sel dan memperbaii stabilitas bahan obat terlarut, sifatnya yang mampu mengendapkan albumin dan menhambat kerja enzim Etanol dapat melarutkan hampir semua bahan organik senyawa  polar maupun senyawa semi polar, sehingga senyawa-senyawa kimia aktif seperti flauonold, alkaloid, tanin dan saponin dapat terlalut dalam pelarut. Selanjutnya isolasi dengan Kromatografi lapis tipis pereparatatif dengan pengembangan yang dapat memisahkan komponen, proses yang terjadi berdasarkan perbedaan daya serap dan daya pertisi serta kelarutan komponen-komponen senyawa kimia yang akan bergerak mengikuti kepolaran eluen oleh karena daya serap adserben terhadap komponen kimia tidak sama, maka komponen bergerak dengan kecepatan yang berbeda sehingga hal ini yang menyebabkan pemisahan. (Munson, 2010)
Kromatrografi adalah teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu, komponen-komponen akan dipisahkan antara dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Adsorbsi dan partisi berdasarkan pada jumlah dan cara pentotolan cuplikan yang berkesinambungan yang memberikan hasil erusi berupa pita. Pemisahan suatu senyawa dari senyawa lain dalam ekstrak, dimana senyawa-senyawa itu akan terpartisi sesuai tingkat kepolarannya, dimana fase alam digunakan siliga gel GF 254, silica gel dapat memadat dalam bentuk tetrahendral raksasa, sehingga ikatannya kuat dan rapat serta mampu menhasilkan proses pemisahan yang lebih optimal. Silica fel GF 254  dengan G melambangkan Gypsum (casou), F melambangkan Floroscene dan angka 254 menunjukan besarnya panjang gelombang uaitu 354 nm. Silica gel dapat membentuk ikatan hidrogen dipermukaannya, karena pada permukaannya terikat gugus  hidroksil atau sifatnya sangat polar. Sementara itu, fase gerak yang digunakan (Etil asetat : Heksan + 1:4) sifatnya non polar makan pada saat campuran dimasukan, senyawa-senyawa yang semakin polar akan semakin tertahan di fase stasioner, dan senyawa yang tidak/kurang  polar akan terbawa keluar kolom lebih cepat. Sebelum dilakukan pentotolan terhadap ekstrak dan cuplikan terlebih daulu dilakukan pengembangan yaitu dengan pita kertas saring dimasukan dalam suatu chamber/bejana yang telah berisi eluen. Tujuan atau fungsi pengembanganyaitu untuk mengetahui bejana/chamber telah penuh dengan partisi antara fase gerak dan fase alam. Setelah dilakukan pengembangan cuplikan yang akan dipisahkan ditotolkan berupa garis untuk sampel/ekstrak pada salah satu sisi pelat lapisan besar serta ditotolkan cuplikan pinostrobin pada silica gel GF254 dimasukan dalam bejana sedikit tegak lurus dalam bejana/chamber diamana sebelumnya pada silica gel telah diberikan garis batas penembangan 1 cm dibawah dan 1 cm dari atas  silica. Kemudian bejana segera ditutup dan mulai dikembangkan, pengembangan hanya sampai garis batas atas tidak boleh melebihi garus batas. Setelah pengembangan telah selesai pelat silica gel diambil dari adalam bejana kemudian dideteksi dengan menggunakan lampu UV 366 nm, bercak dengan pita ditandai, terdapat banyak bercak dalam pita/silica gel dikerok pada bagian bercak yang memiliki tinggi hampir sama dengan cuplikan pinostrobin bercak yang ditandai dikerok dan dilarutkan dalam etanol kemudian etanol diuapkan beberapa waktu. Spot bercak senyawa tersebut terbentuk becak dengan warna kuning dibawah lampu UV. Spot noda dengan letak yang berbeda menandakan terdapat senyawa lain dalam cuplikan tersebut (sebelum diuapkan telah  disaring dahulu).
Setelah mendapatkan hasil dari isolasi secara KLT preparatif kemudian senyawa yang telah didapatkan dilakukan analisis secara kualitatif dengan KLT identifikasi bertujuan untuk senyawa yang telah dipisahkan adalah merupakan senyawa murni atau membuktikan adanya suatu kompnen yang ditiru dalam sampel dilakukan petotolan terhadap hasil isolasi dengan KLT preparatif terhadap silica gel dengan satu titik pentotolan secara berulang dengan pembanding pinostrobin juga ditotolkan segaris dengan senyawa tersebut pada satu titik. Kemudian dikembangkan tidak melebihi tanda batas yang telah dibuat  yaitu jarak 1 cm dari bawah dan 1 cm dari atas silica gel. Namun tidak menghasilkan noda yang jelas pada silica gel yaiatu timbul bercak dan garis (bukan noda, spot 1 titik) vertikal diesebabkan karena kesalahan dalam meletakan dalam bejana/chumber seharusnya sedikit tegak lurus, fase alam tidak terjadinya pengembangan lagi cairan eluen menggenang dalam silica dan tidak dapat terelusi keatas, telah menguapnya keluar bejana antar partisi yang menyebabkan tidak naiknya dalam pengembangan dalam chumber/bejana. Kemungkinan terjadi banyaknya senyawa yang tertinggal dalam kertas saring saat setelah isolasi KLT preparatif yang menyebabkan zat senyawa yang dihasilkan tidak/kurang tegas (bercak yang timbul dilihat dengan lampu UV 366 nm). Sehingga tidak dapat menentukan nilai Rf solut dengan Rf senyawa baku. Hasil ekstraksi sebelum isolasi dengan KLT Preparatif dihasilkan randemen sebesar 47,12%.

G.    KESIMPULAN
a.      Mahasiswa mengetahui langkah-langkah isolasi, mampu melakukan isolasi pinostrobin dari temu kunci dan mengidentifikasi isolat yang diperoleh.
b.     Serbuk Temu Kunci di ekstraksi dengan metode maserasi serta dihasilkan ekstrak cair berwarna kuning muda.
c.       Proses Kromatogrfi Lapis Tipis (KLT) menghasilkan noda flavonoid dari 10 fraksi yang ditotolkan pada isolasi KLT preparatif, dengan menggunakan Fase diam silica gel GF 254 dan Fase gerak Etil asetat serta menggunakan cuplikan larutan sampel dan pembanding pinostrobin, serta tidak didapatkan hasil dari identifikasi senyawa flavonoid sehingga harga Rf tidak dapat ditentukan.

DAFTAR PUSTAKA

Dirjen POM Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1979). Farmakope Indonesia, Edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.

Depkes RI.1986. Sediaan Galenik. Depatermen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.

Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia. Bandung: ITB.

Kristianti, A. N, N. S. Aminah, M. Tanjung, danB. Kurniadi. 2008. Buku Ajar Fitokimia.Surabaya: Jurusan Kimia LaboratoriumKimia Organik FMIPA UniversitasAirlangga.

Lide, David. 2001. Handbook of Chemistry And Physic. Copyright CRC Press LLC.

Robinson, T. 1995.Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi Edisi IV. Bandung: ITB Press.
Rohman,. A,. 2009. Kromatografi untuk Analisis Obat. Graha Ilmu. Yogyakarta.

Rudi,L. 2010. Penuntun Dasar-Dasar Pemisahan Analitik. Universitas Haluoleo. Kendari.

Speight, James. G. 2006. The Chemistry and Technology of Petroleum. Taylor & Francis Group, LLC.

Yazid,. E,.2005. Kimia Fisika untuk Paramedis.Andi.Yogyakarta.


Tidak ada komentar :

Posting Komentar

Langganan: Posting Komentar ( Atom )

Popular Posts

Follow us